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法氏囊抗體檢測的原理及方法
更新時(shí)間:2021-04-15 點(diǎn)擊量:2211
  法氏囊抗體檢測可溶性抗原和抗體的可以在瓊脂凝膠中擴(kuò)散,當(dāng)抗原、抗體相遇時(shí)發(fā)生特異性結(jié)合,在較適處發(fā)生沉淀,此沉淀物因顆粒較大而不擴(kuò)散,形成肉眼可見的白色沉淀帶。
 
  法氏囊抗體檢測的材料與試劑:
 
  普通瓊脂平板、打孔器、針頭、加樣槍、槍頭、V型血凝板、玻璃板、生理鹽水
 
  雞法氏囊陽性血清、法氏囊標(biāo)準(zhǔn)抗原、待檢卵黃抗體/血清
 
  法氏囊抗體檢測的方法:
 
  1.瓊脂板的制備:
 
  1g優(yōu)質(zhì)瓊脂溶于含0.1%石炭酸的8%氯化鈉溶液100ml。用時(shí)倒在平皿內(nèi)或置于玻片上,瓊脂厚度2.5~3mm。
 
  2.打孔:
 
  用打孔器在瓊脂平板上打孔,中央1個(gè)孔,周圍6個(gè)孔,形成梅花形圖案。
 
  要求:孔徑4mm,孔距3mm。
 
  3.挑出孔內(nèi)瓊脂。
 
  4. 封底:在火焰上緩緩加熱,使孔底的瓊脂略熔化封底,避免加樣后液體從孔底滲漏。
 
  5.卵黃液進(jìn)行倍比稀釋。
 
  V型板先在一排每孔加生理鹽水50μl,再在一孔加50μl的卵黃液, 反復(fù)吹吸3次后,吸50μl混和液加入第2孔,吹吸混勻,依次倍比 稀釋至第4孔……較后一孔吸50μl棄去,這樣1至4孔的抗體稀釋倍數(shù)依次為1:2、1:4、1:8和1:16……。
 
  6.加樣:
 
  在中心孔加法氏囊標(biāo)準(zhǔn)抗原約50μl。第1孔加法氏囊標(biāo)準(zhǔn)陰性血清;第2孔加法氏囊標(biāo)準(zhǔn)陽性血清。3、4、5、6孔分別加原液、1:2、1:4、1:8、1:16……的待檢卵黃液。每孔以加滿為度。
 
  7.加畢后,蓋上平皿蓋,將平皿翻過來,置濕盤中,在37℃下自由擴(kuò)散24-48小時(shí)。
 
  結(jié)果判定:
 
  若待檢血清與抗原孔之間出現(xiàn)白色沉淀線,則表示陽性,若不出現(xiàn)沉淀線,為陰性。
 
  若用于檢測血清效價(jià),則以出現(xiàn)沉淀線的血清較高稀釋倍數(shù)表示(2n)。
 
  用于兩種抗原比較時(shí),沉淀線有多種情形,應(yīng)具體分析。

滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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