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葡萄糖含量試劑盒說(shuō)明書(shū)(測(cè)組織、細(xì)菌或細(xì)胞)
更新時(shí)間:2019-10-14 點(diǎn)擊量:1717

葡萄糖含量試劑盒說(shuō)明書(shū)(測(cè)組織、細(xì)菌或細(xì)胞)

 

分光光度法 50 管/48

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義:

葡萄糖不僅是細(xì)胞能量代謝的主要底物,而且其代謝中間產(chǎn)物是生物合成的重要底物。植物可通過(guò)光合作用產(chǎn)生葡萄糖。就哺乳動(dòng)物而言,葡萄糖不僅是大腦神經(jīng)系統(tǒng)、肌肉、脂肪組織等的唯yi能源,而且與還原性輔酶、乳糖和乳脂的合成密切相關(guān)。

測(cè)定原理:

葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并產(chǎn)生過(guò)氧化氫;過(guò)氧化物酶催化過(guò)氧化氫氧化

4-氨基安替比林偶聯(lián)酚,生成有色化合物,在 505 nm 有特征吸收峰。

需自備的儀器和用品:

可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽和蒸餾水

試劑的組成和配制:

試劑一:0.5μmol/mL 葡萄糖溶液 10mL×1 瓶,4℃保存; 試劑二:液體 25ml×1 瓶,4℃保存;

試劑三:液體 25ml×1 瓶,4℃保存;

葡萄糖提取:

1、組織的處理:按照組織質(zhì)量g:蒸餾水體積(mL) 15~10 的比例建議稱(chēng)取約 0.1g組織,加入 1mL 蒸餾水,研磨成勻漿,95℃水浴 10 分鐘蓋緊,防止水分散失,冷卻后, 8000g,25℃離心 10min,取上清液備用。

2、細(xì)菌或細(xì)胞處理:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量104 個(gè):蒸餾水體積mL 500~10001 的比例建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 蒸餾水,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3S,間隔 10S,重復(fù) 30 95℃水浴 10 分鐘蓋緊,防止水分散失,冷卻后,8000g,25℃離心 10min,取上清液備用。

測(cè)定步驟

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至505nm,蒸餾水調(diào)零。

2、混合試劑的配制:使用前將試劑二和試劑三 1:1 等體積混合,用多少配多少。

3、加樣表 EP 管中加入下列試劑

試劑(μL

空白管

標(biāo)準(zhǔn)管

測(cè)定管

樣本

 

 

100

試劑一

 

100

 

蒸餾水

100

 

 

混合試劑

900

900

900

混勻,置 37℃(哺乳動(dòng)物25℃(其它物種水浴中,保溫 15min,于505nm 波長(zhǎng)處讀取吸光度??瞻坠?、標(biāo)準(zhǔn)管和測(cè)定管吸光值分別記為A1A2 A3??瞻坠芎蜆?biāo)準(zhǔn)管只要做一管。

葡萄糖含量計(jì)算:

1、按樣本蛋白濃度計(jì)算

葡萄糖含量(µmol/mg prot)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(V1×Cpr)=0.5×(A3-A1)÷ (A2-A1)÷Cpr。

2、按樣本鮮重計(jì)算

 

葡萄糖含量(µmol/g 鮮重)= (C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)=0.5×(A3-A1)÷ (A2-A1)÷W

3、按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

葡萄糖含量(µmol/ 104 cell)= (C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(500×V1÷V2)=0.001×(A3-A1)÷ (A2-A1)

C 標(biāo)準(zhǔn):標(biāo)準(zhǔn)管濃度,0.5µmol/mL;V1:加入樣本體積,0.1mLV2:加入提取液體積,1mL

Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500 萬(wàn)。

 

注意:低檢測(cè)限為 50nmol/g 鮮重或 0.5nmol/mg prot

 

                        糖原含量說(shuō)明書(shū)         ca ++ mg ++ - atp 酶活性測(cè)定說(shuō)明書(shū)

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